毛细管电泳法测定复方芦丁片中的芦丁和维生素C
李向军 熊辉 袁倬斌*
(中国科技大学研究生院化学部 北京 100039)
摘要 本文用毛细管电泳紫外检测法同时测定了复方芦丁片中芦丁和抗坏血酸的含量，研究了各种条件的影响，得到了优化的实验条件．在30mmol/L的 Na2B4O7-H3BO3 (pH值为7.50)缓冲溶液中，芦丁和维生素C在13min内得到了良好的分离．芦丁和维生素C分别在0.5~0.005mg 和5.0~0.05mg浓度范围内与电泳峰高呈现良好线性关系，检测下限分别为0.002mg和 0.01mg．将之应用于实际样品的测定，结果令人满意．
关键词 毛细管电泳 芦丁 维生素C
复方芦丁片属于维生素类药，主要用于高血压病的辅助治疗，其主要成分为芦丁和维生素Ｃ．芦丁是维生素Ｐ的一种，具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性及抗炎、抗病毒等作用；维生素Ｃ为人体必需的营养成分，临床用于坏血病的预防及治疗，可增加人体的抵抗力[1]．芦丁[2,3]和维Ｃ[4,5]的测定方法有很多，其中液相色谱法[6]较多被应用，陈刚等[7]用毛细管电泳电化学柱端检测法同时测定了复方芦丁片中的芦丁和维Ｃ，但电化学检测法存在电极制备比较困难，操作繁琐的缺点．本文采用紫外检测法同时测定了复方芦丁片中的芦丁和维Ｃ，结果较好．
1 实验部分
1.1 仪器和试剂
ACS-2000毛细管电泳仪(中国科学院研究生院应用化学研究所)；检测波长254nm．未涂层弹性石英毛细管柱(50μm ID，总长50cm，有效长度40cm，河北永年光导纤维厂)；PHS-3型酸度计（上海雷磁仪器厂）．
芦丁(baicalin)对照品（中国药品生物制品检定所），维生素C（分析纯，北京化工厂），复方芦丁片(北京市燕京制药厂，批号98110４)，其它试剂均为分析纯，试验用水为二次重蒸水．
1.2 标准溶液的制备
准确称取芦丁和维生素C，分别用适量乙醇及水溶解，使浓度分别为1.0和10.0mg/mL，以0.45μm滤膜过滤后备用．
1.3 样品溶液的制备
将多片复方芦丁片用研钵研成细粉，准确称取0.5g的粉末于50ml容量瓶中，以30mmol/L硼砂-乙醇(体积比1﹕1)混合溶液20mL于50℃水浴中预热15min后，超声助溶2min后定容，经普通滤纸过滤，即得复方芦丁片样品溶液，以0.45μm滤膜过滤后备用．
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作者简介:李向军(1968),男,博士研究生
基金项目:国家"九五"重点科技攻关项目(96-A23-01-06)和国家自然科学基金(29875027)资助课题
1.4 试验条件的选择
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t/min
图1 样品的毛细管电泳图
Fig.1 The electropherograms of Sample solution
1: Ethanol ; 2: Rutin; 3: Vitamin C |
以30mmol/L硼砂缓冲溶液（硼酸调至pH值为7.50）为电泳介质，未涂层弹性石英毛细管(50μm i.d.，总长50cm，用于分离的有效长度为40cm．所有溶液使用前均用0.45μm滤膜过滤．每次实验后依次以0.10mol/L NaOH溶液、蒸馏水及电泳缓冲液清洗毛细管10min，然后进行分离测定．实验过程中采用电动进样，采样时间5s，采样电压10kV，分离电压10kV，检测波长254nm，测定峰电流的高度．所有实验均在室温下进行．
2 结果与讨论
2.1 缓冲液pH值的影响
电泳液的pH值对分离效果有着很大的影响．在实验过程中发现，随着缓冲溶液pH值的增大，芦丁及维C 的迁移时间均有所减小，分离度变差，故选择pH值为7.50．
2.2 分离电压及缓冲溶液浓度的影响
上述实验条件下分别考察了分离电压(6~20 kV)及缓冲溶液浓度(10~100mmol/L)的影响，结果发现，各组分的迁移率随分离电压的降低而减小，迁移时间增大，分离度提高但谱带展宽且峰高降低．随着高压增高，基线噪音也增大，分离度变差．随缓冲溶液浓度的增加，迁移时间增大，但电流增大会导致毛细管发热，降低分离度．故实验过程中选用10 kV作为分离电压，30mmol/L的 Na2B4O7-H3BO3 (pH值为7.50)为缓冲溶液．在此条件下，芦丁和维生素C在13min内得到了良好的分离．
2.3 进样时间的选择
分离电压10kV ，选择进样时间为２，４，６，８，１０和１２s，测定芦丁与维Ｃ的峰高与进样时间的关系．发现８s后峰高增加不明显，但导致峰展宽和拖尾，故选择进样时间为５s．
2.4 工作曲线及检测限
在上述实验条件下，对一系列芦丁和维Ｃ的标准混合样品进行分析测定，测定其峰高与浓度的关系，所得芦丁和维Ｃ的回归方程、线性范围、相关系数及检测限如表１所示．
表１ 芦丁和维Ｃ的回归方程及检测限
Table 1 The regression equations and the detection limits of Rutin and Vitamin C
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样品 |
回归方程
Y=a+bX * |
相关系数 |
线性范围
(mg/mL) |
检测限 **
(mg/mL) |
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Rutin Y=21.52X+0.21
Vitamin C Y=5.475X-0.49 |
0.9995
0.9990 |
0.5~0.005mg
5.0~0.05mg |
0.002mg
0.01mg |
* Y和 X 分别 表示峰高(nA)和被测物浓度(mg/ml )
** 检测限按3倍噪声计算
2.4 精密度实验
浓度为0.5mg/ml的芦丁和维C对照品溶液各平行进样6次，测得芦丁峰高的RSD为1.91%，迁移时间的RSD为2.76%；维C峰高的RSD为2.84%，迁移时间的RSD为2.63%．
2.5 样品测定及回收率
精密吸取6份样品溶液，每份2.0ml，以缓冲溶液定容于10ml容量瓶中后，依上述实验条件分别测定芦丁和维C的含量(图1)；精密吸取6份样品溶液，每份2.0ml，分别加入芦丁和维C对照品0.2mg和0.5mg，以缓冲溶液定容于10ml容量瓶中后，依上述实验条件进行加样回收实验．所测结果列于下表：
表2 样品测定结果及回收率
Table 2 The detection results of sample and the ratio of reccovery
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样品
Sample
|
标示值
Lable claim
(mg/片) |
测定值(n=6)
Found
(mg/片) |
|
回收率
Recovery
(%) |
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芦丁(Rutin)
维C(Vitamin C) |
20mg
50mg |
20.61
51.87 |
|
99.61
100.6 |
参考文献：
1. 国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册(第一版). 北京.人民卫生出版社,1986.
2. 杨运发. 分析化学, 1996, 24(11):1277
3. 聂峰,李丽青,封满良,吕九如. 分析实验室,1999,18(1):54
4. 中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国药典(二部))．北京．人民卫生出版社, 1990.
5. Li Guanbin, Fan Chunsheng, Xin Cunzhang. Sepu.,1997,15(1):65
6. 张国峰, 缪刚.色谱,1996,14(3):227
7. 陈刚, 丁祥欢, 叶建农.高等学校化学学报.2000,21(9):1364
Separation and Determination of Rutin and Vitamin C
in Compound Rutin Tablets by Capillary Electrophoresis
Li Xiangjun Xiong Hui Yuan Zhuobin
(Department of Chemistry, Graduate school ,USTC, Chinese academy of Science, Beijing)
Abstract: The separation and determination of Rutin and Vitamin C by high performance capillary electrophoresis method was reported. The effects of separation voltage, concentration and pH of the running buffer on the determination were investigated and discussed. Rutin and Vitamin C could be well separated in a 30mmol/L Na2B4O7-H3BO3 buffer (pH=7.50) within 13 min. An good linearity was obtained in the concentration range of 0.5~0.005mg/mL to Rutin, 0.5~0.05mg/mL to Vitamin C. The detection limits were 0.002mg/mL and 0.01mg/mL for Rutin and Vitamin C respectively. The method was successfully used in analysis of the pharmaceutical sample with satisfaction.
Keywords: Capillary electrophoresis Rutin Vitamin C