高效毛细管电泳检测克莱保健烟贴中的尼古丁**

高效毛细管电泳检测克莱保健烟贴中的尼古丁^**

袁倬斌^* 熊辉 李向军

（中国科大研究生院 北京100039）

摘 要 采用毛细管区带电泳法分离测定了克莱保健烟贴中尼古丁的含量。测定结果与高效液相色谱法比较是满意的，在0.06~0.5mg/mL的浓度范围内,峰面积与浓度成线性关系,相关系数为0.9992,最低检测浓度为0.002mg/mL(S/N=2),回收率为96.0%。

关键词 毛细管区带电泳法，尼古丁

1 引 言

     尼古丁是一种生物碱。少量使用有兴奋中枢神经的作用，大量使用则会抑制中枢神经，吸食尼古丁很容易使人上瘾。烟草中含有大量的尼古丁，全世界特别是发展中国家死于吸烟的人数越来越多，吸烟有害健康已成为社会共识，戒烟运动在世界范围已逐渐兴起，出现了各种各样的戒烟药。克莱保健烟贴主要通过向血液渗透稀释尼古丁来抑制烟瘾，对尼古丁的检测是其重要内容。尼古丁的检测方法有薄层色谱法、容量法、电导滴定法等^[1,2,3]。

毛细管电泳是近年来迅速发展起来的一种分离分析技术，具有高效、快速、相对廉价、简单、样品用量少等特点，已广泛用于各种领域^[4]。本文研究了用这一技术分离测定克莱保健烟贴中的尼古丁，获得了比较满意的结果。

2 实验部分

2.1   仪器与试剂

  高效毛细管电泳仪（中科院研究生院应用化学研究所），石英毛细管50mm(id)´60cm，有效长度为44.5cm(河北永年光导纤维厂)，PH-HJ90B型酸度计（上海雷磁仪器厂）。尼古丁（nicotine）标样（中国生物制品检定所），克莱保健烟贴（北京克莱斯瑞控释药业有限公司），其它试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水，样品溶液及缓冲溶液均用孔径为0.45mm滤膜过滤。用甲醇制备标准贮备液（10g/L），使用前用二次蒸馏水稀释成浓度为0.06~0.5mg/mL的工作液。

2.2   实验方法

2.2.1样品处理 取烟贴一张，弃去保护防粘层后置入一具塞小试管中，加氯仿3ml充分振摇，使药膜溶解，精密加入10ml的0.01mol/LHCl溶液充分振摇，静置使溶液分层，取上层盐酸液离心使澄清，吸取上层清液进行分析。

2.2.2操作过程 实验前，用0.1mol/LNaOH、二次蒸馏水依次冲洗毛细管5min，然后用缓冲液冲洗平衡10min，最后施加电压预平衡10min，两次样品分析之间用缓冲液冲洗。采用重力进样方法，进样端高出口端10cm，进样时间30s。

3 结果与讨论

3.1 缓冲液浓度的影响

缓冲液浓度是一个重要的指标，在进行分析时，必须对其进行优化选择。缓冲液浓度对分析的影响实际上是缓冲液离子强度的影响。缓冲液浓度小时，迁移时间短，浓度增加，迁移时间增长，这是由于浓度增加使缓冲液离子强度增加，Zeta电位和电渗流降低，从而导致迁移时间延长。缓冲容量随缓冲液离浓度增加而增大，但增加浓度，电流会增大，产生大量的焦耳热，对分离产生不利影响。综合考虑，本实验选用0.05mol/LNaH₂PO₄ ¾ 10% CH₃OH.。

3.2 缓冲液pH对分离效果的影响

　　作为一个带电粒子在电场作用下的定向迁移过程，电泳技术受到缓冲液pH值的极大影响。要想得到较高的缓冲容量必须使所控制pH值接近缓冲体系的最佳缓冲范围。在毛细管电泳中，组分的分离是基于其有效迁移率的不同，组分的电离程度则由其pK_a值决定，pH值的优化选择是保证pK_a值不同的一个重要条件。毛细管内壁带负电，pH值增高，负电荷增多，电渗流速度增大，导致整体迁移时间缩短。然而由于尼古丁是一种生物碱，呈碱性，在酸性条下，它以离子状态存在，有利分离并产生比较好的峰形。因此，本实验选用pH=4.8。

3.3 工作电压对分离的影响

   毛细管两端的工作电压是组分迁移的原动力。对于既定的柱长，工作电压增大可使电渗流和离子的电泳率都增大。由于电渗流远大于离子的电泳率，故工作电压增大仍可使离子的有效迁移率增大。这可使分析时间缩短，减小组分峰展宽，有利分离。但工作电压过大又可使系统产生严重的焦耳热，引起组分峰展宽，柱效下降。在保证柱效的情况下，为节省分析时间，选用操作电压为25kV。

3.4   标准曲线的测定

  精密移取尼古丁储备液用甲醇配成浓度为0.06~0.5mg/mL标准溶液系列，在选定的实验条件下进样。以峰面积为纵坐标对浓度作图，得一标准曲线。其回归方程为：Y=1359000X-1994.517(r=0.9992)。当信噪比S/N=2时，测得尼古丁的最低检测浓度为0.002mg/mL。

图1样品的电泳谱图

Fig.1 Electropherogram of sample

  条件（conditions）：0.05mol/LNaH₂PO₄¾10%CH₃OH（pH=4.8）；25kV。1,2．杂质（impurities）；3．尼古丁（nicotine）。

3.5 样品的测定与回收率

   在0.05mol/LNaH₂PO₄¾10%CH₃OH（pH=4.8）、操作电压为25kV的条件下，将处理好的样品溶液进样测定，谱图如图1，与高效液相色谱的测定结果比较列于表1中，同时进行标准加入回收率实验，得平均回收率为96.0%，RSD=0.70%

表1样品的测定结果

Table 1 The results of sample determination(n=5)

组分          平均测定结果           相对标准偏差（%）            HPLC法 Component         Found                    RSD                                 (mg/mL)                                            (mg/mL)

nicotine          0.16                  2.6                    0.18

4 结 论

   实验结果表明，用高效毛细管电泳技术可方便迅速地测定克莱保健烟贴中的尼古丁,方法简单实用。

参考文献

1 Drost R H,Reith J F.  Pharm. Weekbl 1967 102:1379-87

2 Molchanov S M, Obraztsova A Kb,Kuboverova V N,etal .Tabak 1969,906:34-5

3Guran K C,Takinap B. Eczacilik Bul 1968,10(7):111-12

4 Morning C A,Kenedy R T. Anal. Chem.,1994,66:208R

High-performance Capillary Electrophoretic Determination of Nicotine in CLETCH-NIC

Yuan Zhuobin  Xiong Hui  Li Xiangjun

(Graduate School,University of Science and Technology of China  Beijing100039)

Abstract Nicotine in CLETCH-NIC was determinated by capillary zone electrophoresis.The result obtained was satisfactory campared to HPLC's.In the range of from 0.06mg/mL to 0.5mg/mL,　the peak area had a linear relation with concentration(r=0.9992).　The detection limit was 0.002mg/mL (S/N=2),　and the recovery was 96.0%.

Keywords  Capillary zone electrophoresis，nicotine